蛋白激酶B免疫组化试剂盒

产品名称：蛋白激酶B免疫组化试剂盒

保存条件：不使用时取试剂盒中一抗保存-20℃(避免反复冻融)，其他均保存 2-8 ℃

试剂盒特点：该试剂盒具有灵敏度高，特异性强、背景清晰、成本低廉等特点，是理想的免疫组化染色试剂盒。适用于冷冻切片、石蜡切片及固定的细胞涂片，可用于检测细胞、组织内的特异性抗原。

温馨提示：本检测试剂盒适用于人、大小鼠，狗等绝大多数组织，但对于内源性生物素含量比较丰富的组织（如肾脏、肝脏等），应选用非生物素检测系统，或用avdin 封闭。

试剂盒所含试剂：

1、货号：YS-0128R ，Rab a AKT，50ul（应用：IHC-P及IHC-F=1:100-500 ）

2、货号：SP-0023 ，3% H2O2去离子水（无色）6ml（内源性过氧化物酶阻断剂）

3、货号：SP-0023-A，Blocking Solution（蓝色）6ml（封闭用正常山羊血清工作液）

4、货号：SP-0023-B Go Anti-Rb IgG/Bio（黄色）6ml（二抗工作液生物素标记羊抗兔IgG）

5、货号：SP-0023-C，Streptavidin/HRP （红色）6ml（辣根酶标记链酶卵白素工作液）

6、货号：C02-04001，DAB显色液 B液（20×） 20ml

7、货号：C02-04002，DAB 显色液 A液（20×） 1ml

8、货号：C01-04001 ，抗体稀释液 30ml

用户自备试剂（用户自行购买，亦可咨询我公司客服购买）：

一、0.1M PBS (pH7.2-7.4)缓冲液：

PBS（phosphate buffered solution）即磷酸盐缓冲液，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲盐溶液，用于分子克隆及细胞培养等，pH为7.2-7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠以。

二、柠檬酸钠抗原修复液：

可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。

抗原修复方法：

方法1：沸水浴修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境，保持外部沸腾状态15min，自然冷却至室温。

方法2：微波修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中，高火5min，停火3min，中火5min，自然冷却至室温。

方法3：高压修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于高压锅，上汽后修复2-5min，然后将高压锅置入凉水中，减压至正常后取出玻片

抗原修复注意事项：

1）脱蜡水化的切片，应避免因切片干燥，而至非特异性染色。

2）热修复操作时务必谨慎，当心烫伤。

3）热修复时间过长易导致脱片，请注意控制时间。

三、DAB（二氨基联苯胺）染色液：

过氧化物酶将使底物发生反应，于反应部位产生棕色沉淀物。标本显色时间一般为室温 5~20分钟，请在显微镜下观察显色况，显色充分后应将标本及时脱水封固。

实验前准备：

一）一抗稀释的准备：

本试剂盒中一抗稀释液适用于免疫组织化学与免疫印迹等实验一抗的稀释，产品添加了抗体保护剂、稳定剂等成分，有效增加了稀释后一抗的稳定性，减少抗体非特异性吸附。

使用说明：按照抗体推荐效价（或个人优化条件），将适量抗体加入抗体稀释液即可。例如，效价为1：100时，可将10ul抗体加入到1ml抗体稀释液中，充分混匀后即可使用。抗体现用现稀释，稀释后的抗体2-8℃可以短期保存，但抗体的效价会随时间而降低。。

二）DAB显色液的制备实验准备：在1毫升显色液B液（DAB 底物液）中，加入1滴（约50微升）显色液A液（DAB浓缩液），混合均匀，即配成DAB工作液。此溶液必须现用现配，配好后避光保存，6小时内使用，剩余的液体应弃去。标本显色时间一般为室温 5~20分钟，请在显微镜下观察显色的情况，显色充分后应将标本及时脱水封固。

实验步骤（建议方案）：

1、石蜡切片，常规脱蜡至水

2、蒸馏水冲洗，pbs 浸泡5 分钟（如需采用抗原修复，在此步骤后进行）。

3、3%双氧水（H2O2）去离子水（无色液体）孵育15-20 分钟，以消除内源性过氧物酶活性。

4、滴加试剂A（蓝色液体）室温孵育15-20 分钟，倾去，勿洗。

5、滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2-3 小时或4℃过夜。

6、PBS 冲洗，3 分钟3 次。

7、滴加试剂B（黄色液体），室温或37℃孵育15-20 分钟。

8、PBS 冲洗，3 分钟3 次。

9、滴加试剂C（橙色液体），室温或37℃孵育15-20 分钟。

10、PBS 冲洗，3 分钟3 次。

11、显色剂显色（DAB 或AEC）

12、自来水充分冲洗。

13、如果需要，可进行复染，脱水，透明。

14、选择适当的封片剂封片。