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反相高效液相色谱结合柱前衍生化法测定人血清中L-门冬酰胺

作者: 2018年12月21日 来源:全球化工设备网 浏览量:
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氨基酸是蛋白质的基本结构单位,是人体完成生理功能的必须物质,人类许多疾病的发生和发展与血液循环中氨基酸的变化有密切联系。因此,血液中氨基酸水平在临床中可作为一些疾病的诊断指针。监测体内氨基酸水平的变化

   氨基酸是蛋白质的基本结构单位,是人体完成生理功能的必须物质,人类许多疾病的发生和发展与血液循环中氨基酸的变化有密切联系。因此,血液中氨基酸水平在临床中可作为一些疾病的诊断指针。监测体内氨基酸水平的变化,对疾病的诊断和治疗有重要参考价值。

   门冬酰胺是机体合成蛋白质的重要氨基酸之一,在体内可水解为门冬氨酸和氨,体内正常细胞也可通过门冬酰胺合成酶合成L-ASN。1996年,Yellin and Wriston研究发现淋巴瘤细胞中门冬酰胺合成酶活性低,不能合成足够的L-ASN,必须从血液循环只能获取L-ASN以合成蛋白质,门冬酰胺酶能催化L-ASN水解,迅速耗竭血液循环中的L-ASN,使肿瘤细胞不能获得足够的L-ASN导致蛋白合成抑制而凋亡,故门冬酰胺酶对淋巴瘤细胞有选择性细胞毒作用。目前,天然的火聚乙二醇修饰的ASNase已成为儿童急性淋巴细胞白血病联合化疗方案中的重要组成部分,对维持患儿持续完全缓解(CCR)起着不可替代的作用。

    本文建立网络邻苯二甲醛柱前在线衍生反相高效液相色谱法,在方法学建立时采用L-ASN耗竭空白人血清作为空白生物基质,能够快速、准确测定人血清中L-ASN,在临床研究中可用于监测ASNase治疗过程中患儿体内L-ASN的耗竭程度,为优化给药方案,降低不良反应提供重要依据。

仪器准备

 

仪器简介

    LC-600A智能全控液相色谱系统由P600高压恒流泵与UV600紫外检测器直接构成等度分析系统。使用WS600工作站可以同时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等,实行多元高压洗脱、波长扫描等功能。

 

应用领域

化合物检测、法医毒物分析、蛋白质组学食品检测、药物分析、环境分析、聚合物分析

谱条件:

 

色谱柱

 Agilent ZORBAX Zclipse AAA(4.6mm×150mm,5μm)

流动相

A:0.01mol.L磷酸盐缓冲液(pH=7.8)

B:水-甲醇-乙腈(10:45:45)

梯度洗脱程序

0-17min,29%B,18-32min,100%B,33-37min,29%B;

进样量

 15μL

 流速

1ml/min

 

测定结果

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